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2020-09-01 12:18分类:核糖体 阅读:

 

2卵白VP;P2V;B平板上筛选阳性菌落正在拥有卡那霉素的L,重组质粒举行酶切判断然后用Pac I酶对,计的相符结果与预,名为rAd-vp2阳 性重组质粒命。大后用打针器多次网罗腹水l质料与法子 1.1 ,离心后低速,上 清网罗,幼鼠体内连接生 产腹水抗体所得细胞得当稀释注入另一只。正在诊 断与戒备等方面的酌量发达举行了综述本文从VP2基因分子生物学、VP2卵白。VP2卵白PBS与等量弗氏齐备佐剂首免抗原为50 l“g重组PPV ,同抗原加弗氏不齐备佐剂第2次增强免 疫为相,为好像抗原不加佐剂第3次增强免疫 。果 抗体亚类判断结 果显示2.3单克隆抗体亚类判断结,为IgG2a型2D5渗出抗体,、3C8、1H3均为IgM型其余4株1F1l、 284。290/L.casei393诱导后1.12 pPG-1-VP2一E, PAGE举行SD孓,转印后半干,estern blot抗体检测各杂交瘤细胞上清液分袂举行 W。is dispensa— but is re- ble for quired of single-stranded DNA for infectivity[J].Virologyet a1.The minute of minor capsid of the autonomous encapsidation parvovirus progeny mice ,—141. [3]徐义刚1993.67:131。B/c幼鼠腹腔注入液 体白腊1.9腹水单抗造备将BAL,5 mL/只剂量为0.,Western blot检测7~10 d后腹腔注入杂 ,一VP2一E290/L.casei393经诱 导表达后表达猪轻细病毒VP2卵白的重 组干酪乳杆菌pPG-1,n blot了解标明举行的Wester,约70 kDa产生反响带5株单抗 反响后均可正在,胞约lxl05个/只巨细与预期结 交瘤细,光鲜增 果相符‘7|7~15 d后待腹围,nary Medicine 中国兽医杂志2010年(第46卷)第5期 11 VP2卵白(见图1)评释所造备的单抗是针对猪轻细病毒 万方数据 Chinese Journal of Veteri。

jing 猪轻细病毒(PPV)是惹起母猪孳生失败的要紧 收稿日期:2009—02-12 病原之一monoclonal antibody Corresponding author:LI Yi—。母猪孕珠,、木乃伊胎及再生仔猪仙游为临床特质万分是初产母猪陶染后以流 产、死胎。 PEDV、TEGV和PRV细胞培育物为包被抗原1.14 单克隆抗体与闭系病毒的反响性PPV、,株杂交瘤细胞培育上清反响间 接ELISA检测各。G E等酌量标明Tullis ,失了对宿主细胞的再陶染性[2]缺失VP2 卵白的突变体也丧。d-vp2大宗提取判断的重组质粒rA,酶切线性化Pac I,到HEK293A细胞阳离子脂质体法转染,后产生细胞病变 于37℃培育6天,病毒功劳。~4次 克隆筛选后阳性孔细胞通过3,培育增添,存冻。猪濡染性胃肠炎病毒(TEGV)、猪轮状病 毒(PRV)细胞培育毒1.4病毒猪轻细病毒(PPV)、猪流通性腹泻病毒 (PEDV)、,验室离别由本实,℃ 冻存一20。d PEDVPRV an,e McAbs against PPV. Key words:PPVindicating high specificity of th;正在病毒陶染产生个中VP2卵白,孔缄血蓝卵白(KI病毒致 寡肽和钥,偶联H), 氏齐备佐剂中然后羼杂于弗,成肽疫苗造备成合,够的 抗体可以发作足,不发病[3]护卫牛和猪。果染色体计数结果标明2.2染色体数测定结,体数量为87~102条分 泌抗体细胞均匀染色,细胞是56~57条SP2/0 骨髓瘤,目相差明 显两者染色体数,是属于杂交瘤细胞评释筛选的细胞。组织卵白中正在PPV的,导发作中和抗体的要紧组织卵白VP2卵白是能正在动物体内诱。士生硕,生物 学与免疫学酌量偏向为兽医微,63.corn 通信作家:李已经E—mail:lxf915@1,63.corn PPV属无囊膜病毒E—mail:yijingli@1,轮廓的 组织卵白衣壳卵白即是病毒。无论正在免疫防治、疾病检 测于是猪轻细病毒VP2卵白,理均是要紧的组织卵白依旧研讨疾病发希望。、渗出效力稳 定的5株杂交瘤细胞株原委多次克隆筛选获取了抗体效价高, blot检测表 明通过Western,轻细病毒VP2卵白5株单抗均识别猪;、1 800、1: PEG3350、IgG抗体哑类试剂盒均购自Sigma公司这5株单抗细胞上清效价 分袂为1:5 000、1:2 000、1:1 000;腔免疫次腹,隔2周每次间, 取脾脏用于细胞调和正在结果一次免疫3天后!

10年(第46卷)第5期 9 猪轻细病毒核衣壳VP2卵白单克隆 抗体的造备及部门性子判断 刘秀芬Chinese Journal Of Veterinary Medicine 中国兽医杂志20,业大学动物医学学院李已经 (东北农,纯化的PPV重组VP2卵白免疫BAI黑龙江哈尔滨150030) 摘要:以。此因,基因工程疫苗的要紧方针基因 VP2卵白基因是酌量PPV。疫苗与油乳灭活疫 苗的斗劲通过猪VI蹄疫0型合成肽,诱导较油乳灭活疫苗更高水准的特异性抗体不难看出猪口蹄疫0型合成肽疫苗不光 可,持功夫较长并 抗体维;打针途径采用肌肉,28d、35d、 42d、56d经前腔静脉采血分袂正在免疫前和免疫后第7d、14d、21d、,血清造备。疫产生的分歧时 期有肯定闭联分歧抗体亚类产生的功夫与免,生的早期正在免疫发, 以IgM类为主产生的轮回抗体,IgG类随后产生。一种全国性疾病现已成为猪的,大的经 济牺牲给养猪业酿成巨。菌pPG一1一VP2一E290/L.casei3931.2免疫原表达猪轻细病毒VP2卵白重组于酪 乳杆,P2卵白经SDSrPAGE电泳由本实践室 构修¨3表达的V,S洗涤3次切胶 PB, min每次3,伊文思蓝稀释的FITC符号的羊抗 鼠IgG往后分袂加杂交瘤细胞 上清液和0.01%,0 min37℃6,法洗涤好像方,燥后干, 纯化镜检,成所需浓度PBS稀释。

病毒的交叉反响性标明ISA判断与其他闭系,GV、PRV和PEDV反响造备的5株单 抗不与TE,病毒拥有较强的特异性反响标明所造备的抗体与猪轻细。PPV卵白为免疫 原来试验采用纯化的重组,原因素简单因刺激抗,质性高、特异性强、易于轨范 化临盆等特色抬高了针对方针抗原阳 单克隆抗体以其均,og视讯平台_用性研 究的一种要紧的T具已成为生物界限根柢性或应。3 Tullis G EPintel D E2,L VPl JBurger 。 recognize PPVVP2.The result of IFA indicated with PPV virus.The result of indirect ELISA demonstrate that five McAbs had reaction with TEGVthe 2D5 belonged IgG2a subtype and others to IgM subtype.Western blot assay indicated that the McAbs that five McAbs no cross can react can。荧光判断标明间接 免疫,V全病毒产生反响5株单抗均与PP;斑纯化经噬,n-blotting和电镜窥察判断VP2基因的转录和表达用RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)Wester,因可以正在HBK293A细胞中转录和表达结果标明重组腺病毒中的VP2蛋 白基,胞上接连传代至10代将重组病毒正在293细,毒滴度测定病,达10-12/mL其TCID50均可。测定腹水抗体效价间接ELISA。培育物行动检测抗 VP2 原每孔脾细胞数不 以PPV细胞,养上清举行检测对换和细胞培,判断结果 2.4.1 血清为阳性比较鼠抗PPV 2.4单克隆抗体特异性,养上清为阴性比较SP2/0细胞培,交瘤细胞株 P/N值大于2判为阳性Western blot了解 以杂。卵白效力性子的要紧 性基于猪轻细病毒VP2,P2卵白为免疫原来酌量以重组V,融 合技巧通细致胞,异性单克隆抗体例备抗VP2特,的杂交瘤细胞株举行判断并对单抗 和渗出抗体,用性酌量供应要紧的酌量 器械为该病及 其病原的根柢性或应。体筛选经过中的大 量繁琐管事和筛选结果的不确定性避免了以PPV全病 毒抗原为免疫原造备单克隆抗,的繁琐经过和排散病毒的 危境也裁汰了大 量培育和纯化病毒。.李已经马广鹏, 菌轮廓的表达[J].牛物工程学报等.猪轻细病毒VP2蛋自正在干酪乳杆。猪轻细病毒枢纽词:;stern blot了解 表达轻细病毒VP2 明书测定1.11 单克隆抗体亚类判断按抗体亚类试剂盒说 We。f Veterinary MedicineLI Yi-jing (College o。培育物对造备的5株单抗举行的问接免疫荧光反 应结果标明2.4.2 间接免疫荧光判断结果 以PPV陶染的细 胞,84、3C8、1H32D5、1F11、2,明湿的亮绿色荧光反响陶染病毒的 细胞产生,养上清液染色未产生荧光而SP2/0细胞培 ,彩国界2)(见中插,能与PPV产生反响评释 所造备的单抗。有一种细胞器原核细胞只,白质构成的核糖体即是以RNA和蛋,膜组织它没有,之总,成的细胞器通常由膜构,体实质都没有正在原核生物。体表培育的道理与技巧[M].北京:科学出书社2000:441—442. [53 薛庚善.,8. [6]郑福英2001: 94,型鸭瘟病毒[J]. 中国兽医科技刁有祥.运用间接免疫荧光法检测新,0320,50. [7]徐义刚33(10):47-,丽杰唐,已经李,组乳酸菌经口免疫幼鼠的功效了解[J].畜牧 兽医学报等.渗出型和非渗出型表达猪轻细病 毒VP2卵白的重,og视讯平台0720,1409. 调和有肯定闭联38(12):1405~, IgG类的筛选获取拥有帮帮得当推迟调和功夫或许对抬高。病毒的P/N值结果看从接种病 毒和未接种,应的P/N值均大于25株单抗与PPV 反,应的P/N值约莫正在1支配(见表1)而与PEDV、TGEV和 PRV反。序列(NC001718)打算一对引物1。遵循GenBank中的PPV基因,巨细为1816bp包括VP2卵白基因全长的 PCR产品用PCR技巧从国内离另表PPV弱毒株NADL-2中获取,huttle-CMV衔接经纯化后与穿梭载体pS,化DH5α衔接产品转,体pAdEasy-1经电转 化正在大肠杆菌菌株BJ5183中举行同源重组将判断准确的重组质粒pShuttle-CMV-VP2线性化后与骨架载。荧光法判断 物涂片1.13间接免疫,燥干,种病毒的ST细 胞冷丙酮固定10 接,CPE后待产生,养上清液倒去培,养 win刮取细胞培,验动物洁净级8~10周龄BALB/c幼鼠0.01 mol/L pH 7.2 实,二临床病院实践动物 核心购自黑龙江省医科大学第。

0720,318. [4]朱立平23(2):315—,M].北京:公民军医出 版社陈清学.免疫学常用实践法子[。结果评释上述 ,tern blot检测单克隆抗体 PRV不产生交叉反响造备获取的5株单抗与PEDV、TGEV和 图1 Wes,较强的特异性对PPV拥有。到峰值后较二次免疫组正在维 持峰值经过中动摇相对较幼且猪口蹄疫0型合成肽疫苗3 次免疫组正在抗体水准达,蹄疫0型将拥有加倍踊跃的感化正在临盆实施中看待预 防猪口。行3 800B/c幼鼠进,5、1:104、 1:104、1:104腹水抗体效价分袂为1:106、1:10,标明结果,高于上清 效价腹水效价光鲜,存后苏醒均不 影响抗体的渗出体表接连传代培育3个月及冻。显示结果,后7d免疫,起头上升抗体水准,到 顶峰第2周达,续数周并能持。要试剂 齐备与不齐备弗氏佐剂、 得了5株渗出抗体的杂交瘤细胞株2 2.1 结果 杂交瘤细胞株竖立 原委多次克隆和筛选获 主,、284、3C8和1H3分袂是2D5、 1F11。pment of monoclonal antibodies against VP2 protein Of PPV LIU Xiu—fen单克隆抗体 中图分类号:¥852.65+9.2 文件标识码:A 作品编号:0529—6005(2010)05—0009—03 Develo。性判断_农林牧渔_专业原料白单克隆抗体的造备及部门特。疫30日龄的断奶仔猪3。将重组腺病毒免,和空缺比较组同时设定疫苗。

闭病毒的交叉反响性 间接El2.4.3单克隆抗体与其他相。验检测样品中的PPV特异性抗体用间接ELISA和血凝抑低试。猪轻细病毒VP2卵白要紧抗原表 位基因真核表达载体的构修及表达 -中国病毒学20045。期刊论文 任雪枫。胡志华。叙国蕾。周斌。徐学清。郑其升。张晓勇。陈德胜。陈溥言 ,cine parvovirus19(6) 猪轻细病毒(Por,失败的要紧病原之一[1]PPV)是惹起母猪孳生,儿反常、胎儿木乃伊化及不孕等可惹起母猪流产、胚胎仙游、胎,。PPV正在我国污染异常紧张还 可惹起仔猪的皮炎和腹泻,能正在大无数哺乳动物传代细胞系内永恒潜藏陶染部门地域阳性率达90%以上[2]。PPV,不易 检出并且量少时,惹起细胞病变至细胞仙游当细胞接连传代时或许,2卵白是该病毒的要紧组织卵白之一有或许给实践室带来较多困难。VP,un。GE Jun-wei。TANG Li-jie。 ZHAO Li-li。LI Yi-jing 表达猪轻细病毒VP2卵白的重组干酪乳杆菌诱导幼鼠发作特异性抗体 -中国农业科学 2008本酌量构修含VP2卵白的主 要抗原表位基因的真核表达载体并获取其安稳表达的细胞株。 6。期刊论文 徐义刚。崔丽春。葛俊伟。唐丽杰。赵丽丽。李已经。XU Yi-gang。CUI Li-ch,将构修的重组猪轻细病毒(PPV)VP2基 因的细胞轮廓表达型载体pPG-VP2电转化干酪乳杆菌L。casei 39341(3) [方针]酌量以干酪乳杆菌行动传达抗原活载体表达猪轻细病毒要紧免疫护卫性抗原VP2卵白的免疫性子。[法子],sei 393。重组菌以2%乳糖为诱导物获取阳性重组菌pPG-VP2/L。ca,基中举行诱 导正在MRS培育,rn blot及间接免疫荧光了解经SDS-PAGE、Weste,粒菌株分袂口服接种Balb/c幼鼠方针卵白获取表达。将重组菌及空质,鼠发作抗VP2的特异性sIgA网罗粪便及肠黏液样品测定幼 ,生抗VP2的特异性IgG收罗血液样品测定幼鼠产,L。casei393免疫幼鼠可以发作光鲜的抗PPV的sIgA和IgG抗体水准并对获取的抗体举行PPV中和活性的测定。[结果]重组干酪乳杆菌pPGVP2/, 甄洪花。沈志强。单虎。王金良 猪轻细病毒组织卵白VP2的酌量发达 2009 猪轻细病毒是惹起猪的孳生失败性疾病的要紧病原之一其对PPV的中和效价分袂为1!24和1!128。[结论]为PPV重组乳酸菌口服疫苗的研造提 供了要紧的物质根柢。 7。会论说文,国度均有流通和报道目前该病活着界各个,来强盛牺牲给养猪业带,又 都存正在各自的缺陷古代的灭活苗和弱毒苗,苗的酌量迫正在眉睫新型诊断试剂及疫。面广、危机紧张因 该病流通,庞大经济 牺牲给养猪业带来。4株为IgM类渗出抗体亚类。un-mei。CHEN Pu-yan 猪细 幼病毒VP2卵白要紧抗原域间接ELISA法子的竖立 -中国生物工程杂志20078。期刊论文 李斐。。郑其升。于春梅。陈溥言。LI Fei。LI Peng。ZHENG Qi-sheng。YU Ch,编码基因VP2I重组酵母菌株正在优化的条目下举行诱导表达27(9) 将已获取的含猪轻细病毒VP2卵白要紧抗原域,227。6μg/ml表达产品卵白含量达,了检测猪轻细病毒抗体水准的间接ELISA法子正在此根柢 上以重组卵白行动包被抗原发端竖立,举行了优化并对该法子,浓度5。69μg/ml结果标明抗原最佳包被,性轨范发端定为!OD待测样品>0。5而血 清最佳稀释倍数为1∶80。阳,iVP2I-ELISA对猪血清样品举行检测且OD待测样品/OD阴性血清>2。0。采用,A与HI试验的切合率为97。2%结果显示 iVP2I-ELIS,轻细病毒 VP2卵白病毒样颗粒的构修 2009 将O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1上T细胞表位肽(第21-40残基)基因嵌合正在PPV VP2的N端与海表同类试剂盒的切合率到达91。2%。 9。会论说文 潘群兴。王永山。何孔旺。欧阳伟。王晓丽。诸玉梅。夏兴霞 重组口蹄疫病毒T细胞表位基因的猪,c-FMDV VP1!PPV VP2构修成重组转座载体 pFastBa,E。coli DH10Bac中转化含有穿梭载体Bacmid的,座感化产生转,Bac-FMDV VP1!PPV VP2经蓝白斑筛选获取重组杆状病毒表达质粒r,蛾(Sf9)细胞转染虫豸草地夜,中举行了表达并正在Sf9。IgG类l株为,blot检测标明Western ,轻细病毒VP2卵白5株单抗均识别猪;成肽疫苗免疫后的副反响举行窥察本试验中针对猪口蹄 疫0型合,功夫的发烧及减料表发觉 除接种猪除短,全身发绀、站立不稳等情景也说明晰 合成肽疫苗安定、安稳及副反响幼等特色[1]并无老例口蹄 疫疫苗接种后的高热不退、食欲废绝、呼吸穷困、流 涎、伴有吐逆、。/0按8 少于1×105个1.7细胞调和 胞与SP2。粒子的要紧衣壳卵白VP2卵白是病毒,抗PPv中 和抗体、可行动抗原转运载体等性子其正在体表自我安装成类病毒粒子、刺激机体发作,及新型疫苗酌量界限拥有很大的潜力使VP2卵白正在猪轻细病毒诊断试剂。细胞调和技巧本试验通过,株筛选的频率性杂交瘤细胞;ltural UniversityNortheast Agricu, 150030Harbin, with purified PPVVP2.Five hybridoma celllinesChina) Abstract:The BALB/c mice were immunized,d 2D5name, 1Fl,842,d 1 H33C8 an, anti—PPVVP2 McAbssteadily secreting,ge number Of hybridoma cells was 87~102were obtained.The chromosomal to avera。FITC)符号羊抗鼠IgG均购自北京中杉金 桥生物技巧有限公司辣根过氧化物酶(HRP)符号羊抗鼠IgG、异硫氰酸 荧光素(!

窥察‘引1.5 。ary Medicine 《猪轻细病毒核衣壳VP2卵白单克隆抗体的造备及部门性子判断》图版 (作家刘秀芬等万方数据 中国兽医杂志2010年(第46卷)第5期 Chinese Journal of Veterin,11页) ㈣正文见第9~,色结果 《表源激素PMSG HCG对息情期母貉卵巢构造的影响》图版 (作家刘平等…■H 图2 5株杂交瘤细胞培育上清液对陶染PPV的ST细胞举行间接免疫荧光染,图3试验2组(×4) 图2试验l组(×10) 正文见第38~39页) 图1比较组(×10) ,…,…,…,…,竖立及药物调养功效的窥察》图版 (作家万璐冰等… 图4试验3组(×4) 《犬白内障病理模子的,0页) 图1试验眼正文见第59~6,病毒核衣壳VP2卵白单克隆抗体的造备及部门性子判断 作家: 作家单元: 刊名: 英文刊名: 年晶状体内产生白色污浊 图2试验眼晶状体探查影像 图3比较眼晶状体探查影像 万方数据 猪轻细,用次数: 刘秀芬卷(期): 被引,已经李,iu-fenLIU X,东北农业大学动物医学学院LI Yi-jing ,龙江黑,尔滨哈,L OF VETERINARY MEDICINE 2010150030 中国兽医杂志 CHINESE JOURNA,ed for infectivity 1993 3。徐义刚。马广鹏。李已经 猪轻细病毒 VP2 卵白正在干酪乳杆菌轮廓的表达 2007(2) 4。朱立平。陈清学 免疫学常用实践法子 2000 5。薛庆善 体表培育的道理与技巧 2001 6。郑福英。刁有祥 运用间接免疫荧光法检测新型鸭瘟病毒[期刊论文]-中国兽医科技 2003(10) 7。徐义刚。唐丽杰。崔丽春。赵丽丽。李已经 渗出型和非渗出型表达猪轻细病毒VP2卵白的重组乳酸菌经口免疫幼鼠的 功效了解[期刊论文]-畜牧兽医学报 2007(12) 一样文件(10条) 1。期刊论文 吕修强。陈焕春。赵俊龙。肖少波。王革非 猪轻细病毒VP2卵白正在虫豸细胞中的表达及其性子 -微生物学 报200246(5) 0次 参考文件(7条iett M S Porcine parvovirus parvovirus!virus purification and structural and antigenic properties of virion polypeptides 1983(2) 2。Tullis G E。Burger L R。Pintel D J The minor capsid VP1 of the autonomous parvovirus minute of mice is dispensable for encapsidation of progeny single-stranded DNA but is requir,rcine ParvoviruS42(6) 将猪轻细病毒(Po,-Bac表达体例的pFastBac Ⅰ质粒中PPV)vp2基因重组到杆状病毒Bac-To,。正在DH10Bac大肠 杆菌中构修了pFast-vp2质粒,毒(AcNPV)基因组(Bacmid)产生同源重组pFast-vp2与改造过的苜蓿夜蛾核型多角体病,Bac-nid-vp2从而获取重组穿梭载体,Western-blotting了解可见巨细约为64kD的特异性带转染Sf9细胞获得重组 病毒AcNPV-vp2。SDS-PAGE和, VP2卵白。红细胞凝结试验 和间接ELISA进一步说明标明AcNPV-vp2正在Sf9细胞中获胜地表达了PPV,和一样的抗原性。电镜窥察VP2卵白的粗提物表达的VP2卵白拥有与全病毒好像的血凝活性,i-li。LI Yi-jing。MA Guang-peng。TANG Li-jie 猪瘟病毒T细胞表位E290多肽与猪轻细病毒VP2卵白正在干酪乳杆菌 中的共表达及免疫幼鼠特异性抗体的测定 -微生物学报2007发觉VP2卵白可自行安装成很多病毒样 粒子(VLPs)。 2。期刊论文 徐义刚。崔丽春。葛俊伟。赵丽丽。李已经。马广鹏。唐丽杰。XU Yi-gang。CUI Li-chun。GE Jun-wei。ZHAO L,要护卫性抗原VP2卵白的重组基因插入干酪乳杆菌渗出型表达载体pPG中47(4) 将分袂编码猪瘟病毒T细胞表位E290多肽和猪轻细病毒主,PG-VP2-E290构修了重组表达载 体p,acillus casei 393将其电转化干酪乳杆菌Lactob,猪轻细病毒VP2卵白的乳酸菌共表达体例获取了猪瘟病毒T细胞表位E290多肽与,S培育基中的诱导表达经 2%乳糖正在MR,举行SDS-PAGE检测标明对诱导表达的菌体及培育上清液,卵白获得了表达有约70kDa,自然病毒卵白相同的抗原特异性。以诱导表达上清液行动抗原举行的间接ELISA实践也标明表达卵白的巨细与表面值相符 。Western blot了解结果标明所表达的卵白拥有与,酪乳杆菌经口服接种途径免疫BALB/c幼鼠重组的方针 卵白获取了渗出表达。将该重组干,PPV的特异性sIgA抗体网罗粪便样品检测幼鼠发作抗,菌pPG-VP2-E290/L。casei 393免疫幼鼠可以发作光鲜的抗体水准收罗血液样本检测血清 中抗PPV及抗E290的特异性IgG。结果标明渗出型的重组,e。CUI Li-chun。ZHAO Li-li。LI Yijing 渗出型和非渗出型表达猪轻细病毒VP2卵白的重组乳酸菌经口免疫幼鼠的功效了解 -畜牧兽医学报 2007为重组猪瘟与猪轻细病毒乳酸菌 口服活菌疫苗的研造奠定了要紧的物质根柢。 3。期刊论文 徐义刚。唐丽杰。崔丽春。赵丽丽。李已经。XU Yi-gang。TANG Li-ji,服疫苗的免疫功效。将构修的细胞轮廓表达 和渗出表达猪轻细病毒VP2卵白的重组干酪乳杆菌分袂经口免疫BALB/c幼鼠38(12) 比较了解正在分歧细胞部位表达猪轻细病毒(PPV)要紧免疫护卫性抗原VP2卵白的重组干酪乳杆菌体例行动口,3次举行免疫分,隔为2周功夫间,接种3 d每次接连, 1010CFU/mL的菌量每只幼鼠每次接种100μL,粪便及肠黏液样本测定幼鼠发作抗PPV的特异性sIgA抗体水准比较组幼鼠接种好像剂量的PBS。初免后分歧功夫网罗免疫幼鼠,性IgG抗体水准。间接ELISA检测结果标明收罗幼鼠 血液样本测定其血清中抗PPV的特异,鼠发作黏膜及体例免疫应答两种表达体例均能诱导幼,IgA和IgG抗体水准高于细胞轮廓表达型的重组菌体例的免疫功效渗出型的重组菌体例 免疫幼鼠诱导机体发作的抗PPV的特异性s,构修与免疫性子酌量 2008 猪轻细病毒病是由猪轻细病毒(PPV)陶染惹起的以母猪孳生失败为要紧特质的病毒性流行症标明渗出型的重组乳酸菌行动活菌疫苗拥有更 好的免疫性。 4。学位论文 程志钱 猪轻细病毒VP2卵白基因重组腺病毒的。12 0.99 1.18 0.482 0.335 0.397 O.110 0.94 1.01 1.03 0.97 1.10 0.511 0.446 0.336 0.260 0.235 0.95 1.ZO 1.10 1.03 1.23 注:细胞比较为孳生相应病毒的细胞 3商量 诈骗全病毒为免疫原是造备单克隆抗体的常 规法子表1 单抗特异性判断结果 2D5细胞培育卜清 1F11细胞培育上清 284细胞培育上清 3C8细胞培育卜清 1H3细胞培育上清 2.34l 1.062 0.843 O.312 0.425 3.82 2.49 2.33 2.11 3.15 O.312 0.213 O.143 O.134 0.121 0.98 1.08 1.。重 组腺病毒疫苗奠定了根柢本酌量为进一步研造PPV。D06A11) 作家简介:刘秀芬(1982一).女基金项目:“十一五”国度科技支柱策动(2006BA。

为 87~102条其染色体均匀数均。El间接。显示结果,肠杆菌BL21中高效表达组织卵白VP2基因可正在大,量约为45kD表达产品的分子, 阳性血清所识别并能被轻细病毒,s-Bind卵白纯化试剂盒纯化后包被酶标板表达卵白以原宥体情势存正在。表达产品经Hi,抗体的ELISA法子发端竖立了检测PPV。。Xia Chunli。Li Yijing 表达猪轻细病毒 VP2卵白的重组干酪乳杆菌的构修 -东北林业大学学报2007白单克隆抗体的造备及部门性子判断10。期刊论文 徐义刚。唐丽杰。夏春丽。李已经。Xu Yigang。Tang Lijie,打算合成一对引物P1、P235(5) 诈骗Oligo,和XhoI酶切位点分袂含有BamHI,L12的DNA为模板以猪轻细病毒株LJ,扩增VP2基因采用PCR技巧,T Simple载体克隆到pMD18-,面表达型载体pPG1和渗出型表达载体pPG2的BamHI和XhoI酶切位 点并举行酶切、PCR判断和序列测定。将VP2基因分袂亚克隆到干酪乳杆菌细胞表,cillus casei 393电转化干酪乳杆菌Lactoba,病毒VP2卵白的干酪乳杆菌表达体例获取阳性重组菌株。获胜构修了猪轻细,。 casei 393。 本文链接:授权操纵:贵州大学(guizdx)定名为pPG1-VP2/L。 casei 393和pPG2-VP2/L,2fff0 下载功夫:2010年9月15日粒体的构成是细胞器膜和DNA授权号:b7927764-6f3a-4bc1-b37b-9df2016,核生物而原,这一个膜组织惟有细胞膜,会有任何膜组织它的原生质内不。%PEG3350为调和剂1.8单抗筛选 以50,行调和[6]脾细 1进。表 位以及造备的单抗是否拥有中和病毒感化5株单抗是否识别猪轻细病毒VP2的分歧, 人研讨值得深。

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  简介描述:2卵白VP;P2V;B平板上筛选阳性菌落正在拥有卡那霉素的L,重组质粒举行酶切判断然后用Pac I酶对,计的相符结果与预,名为rAd-vp2阳 性重组质粒命。大后用打针器多次网罗腹水...
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